Выделение и определение фурокумаринов из борщевика методом тонкослойной хроматографии

ВВЕДЕНИЕАктуальность темы. Борщевик Сосновского (Heracleum sosnowskyi Manden.) – дву- или многолетнее растение семейства Сельдерейные, или Зонтичные (Apiaceae Lindl. syn Umbelliferae).В виду высокой урожайности в климатических условиях Российской Федерации, способности быстро воспроизводиться семенами и высокому содержанию в биомассе белков, сахаров, витаминов и микроэлементов предполагалось его использование как продовольственной и кормовой культуры [17].К сожалению, присутствие фурокумаринов в надземной части растения негативно сказывалось на здоровье животных и людей, вызывая дерматиты и ожоги [5].Следует отметить, что данное растение внесено в черный список растений ряда регионов как инвазивный вид, препятствующий возобновлению видов природной флоры, что указывает на возможность совместить заготовку растительного сырья от данного вида и ликвидировать неконтролируемые заросли [7].С учетом вышесказанного борщевик Сосновский является перспективным растительным источником фурокумаринов, при условии разработки рациональной технологии выделения и анализа данной группы органических соединений.Цель работы – систематический анализ и обобщение литературных данных по вопросу выделение и определения фурокумаринов борщевика Сосновского методом тонкослойной хроматографии.Для выполнения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:Охарактеризовать метод тонкослойной хроматографии как один из методов исследования органических соединений в современной химии;Привести краткую характеристику фурокумаринов как группы биологически активных соединений растительного происхождения, включая биологическую активность, физико-химические свойства, методы выделения, анализа фурокумариновОписать возможность использования тонкослойной хроматографии при анализе фурокумаринов;Рассмотреть борщевик Сосновского как перспективный источник фурокумаринов;Изучить пути использования тонкослойной хроматографии для разделения и анализа кумаринов борщевика Сосновского.ОСНОВНАЯ ЧАСТЬТонкослойная хроматография как современный метод анализа соединенийТонкослойной хроматографией или хроматографией в тонком слое сорбента называют хроматографический процесс, протекающий при движении подвижной фазы в тонком слое сорбента, нанесенном на инертную твердую подложку (пластинку) из соответствующего материала – стекла, металла или полимера [8].Разделение может осуществляться по различным механизмам: адсорбционному, распределительному, ионообменному или какой-либо их комбинации [14].Хроматографическое разделение осуществляется в результате движения анализируемых веществ в тонком слое (неподвижной фазе), растворенных в растворителе или соответствующей смеси растворителей (подвижная фаза, элюент). При разделении вещества образуют на поверхности сорбента зоны адсорбции в виде пятен (круглых или эллипсовидных) или полос [8, 14].Для проведения тонкослойной хроматографии необходимо иметь следующие основные приборы и материалы:пластинки с закрепленным слоем сорбента (неподвижной фазы) различных модификаций;хроматографические камеры;калиброванные капилляры и микрошприцы;устройства для нанесения на хроматограммы обнаруживающих реагентов (пульверизаторы для опрыскивания, камеры для погружения хроматограмм в раствор и др.);стандартные образцы, растворители, реагенты для обнаружения хроматографических зон;облучатели с УФ-лампами на 254 и 365 нм;системы обработки и хранения данных [14, 23].Качественной характеристикой в тонкослойной хроматографии является величина Rf (англ. ratio of fronts - отношение фронтов, или в иной трактовке retention factor – фактор удерживания), равная отношению расстояний, пройденных зоной вещества и фронтом растворителя (рисунок 1):Rf=ab, где a – расстояние от точки нанесения пробы до центра пятна, характеризующего зону адсорбции;b – расстояние от линии старта до линии фронта элюента.Таким образом величина Rf может находится в пределах от 0 до 1 [8, 14].Рисунок 1 – Типовая хроматограмма в тонкослойной хроматографииПри разделении сложных смесей иногда используется двумерная хроматография, которая включает два этапа. После хроматографирования в первой системе пластинку высушивают и хроматографируют во второй системе, повернув на девяносто градусов таким образом, что линия, вдоль которой располагаются зоны разделившихся веществ, на этот раз служит линией старта. Если каждое из пятен вначале содержало несколько не разделившихся компонентов, они могут разделиться на втором этапе исследования (рисунок 2) [14, 24]. Рисунок 2 – Типовая хроматограмма в двумерной тонкослойной хроматографии: А – после хроматографирования в первой системе раствориелей, Б – после разворота пластинки и хроматографирования во второй системе растворителейВеличины Rf, полученные на первой и второй стадиях анализа, в сумме дают более полную информацию о веществах, чем при обычном (одномерном) хроматографировании.В настоящее время существует высокоэффективный вариант тонкослойной хроматографии – высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ). За счет меньшего размера частиц силикагеля (ТСХ - от 5 до 17 мкм, ВЭТСХ – от 2 до 5 мкм), пластинки для ВЭТСХ обеспечивают более высокие скорости разделений, лучшее разрешение и селективность чем обычные ТСХ пластинки [20].Обнаружение (детектирование) зон адсорбции после проведения качественной и полуколичественной ТСХ осуществляют следующими способами:в видимом и ультрафиолетовом свете (при определенной длине волны);опрыскиванием растворами обнаруживающих реагентов;выдерживанием в парах обнаруживающего реагента;погружением в растворы обнаруживающих реагентов с использованием для этих целей специальных камер [8, 23].Количественное определение соединений может осуществляться непосредственно на хроматограмме либо после элюирования вещества с сорбента.На хроматограмме количественное содержание вещества определяют:планиметрически (по площади пятна)При планиметрии измеряют площадь пятна, например, с помощью миллиметровой кальки, и проводят расчет по предварительно построенному калибровочному графику (строится после хроматографировании серии разведение стандартного образца). Ошибка определения составляет 6 - 8% [14].денситометрически (по интенсивности окраски или оптической плотности пятна)Измерение оптической плотности пятна проводится с помощью прибора - денситометра, определяющего степень поглощения веществом отраженного или проходящего через хроматограмму света. Расчет содержания вещества в денситометрии проводится также с использованием калибровочного графика. Ошибка составляет 5 - 8% [14].Планиметрический метод является достаточно трудоемким, денситометрический требует специального оборудования, поэтому на практике они используются редко. Более удобным является хроматоспектрофотометрический метод - количественное определение, выполняемое после элюирования вещества, с использованием спектрофотометрии или другого общепринятого метода [23].Метод тонкослойной хроматографии получил широкое применение во многих отраслях промышленности (пищевой, фармацевтической, косметической и т.д.) для решения аналитических (разделение, идентификация и полуколичественная оценка содержания соединений в смеси) и препаративных задач (выделение и очистки индивидуальных соединений смеси) [8, 14].Однако, для научно-исследовательских задач метод тонкослойной хроматографии может быть положен в основу скринингового поиска при определении неизвестных веществ [8, 14]. При этом вещества заранее разделяют на группы в зависимости от их хроматографических характеристик, например, относительных величин Rf, расположения на пластинке по отношению к метчикам или по сочетанию величин Rf и способности давать реакции окрашивания с определенными реактивами. Отнесение вещества к одной из скрининговых групп позволяет сузить диапазон поиска и сократить время анализа. Однако для использования скрининговых методов исследования необходимо иметь банк данных по веществам анализируемых групп [8, 14].Краткая характеристика фурокумаринов как группы биологически активных соединений растительного происхождения. Фурокумарины (кумарон-α-пироны) – группа природных соединений, содержащие ядро фурана, сконденсированное с 9,10-бензо-α-пироном в положениях 6,7 (тип псоралена) или 7,8 (тип ангелицина) [6].Структурные формулы типичных фурокумаринов представлены на рисунке 3.ПсораленАнгелицин (изопсорален)Рисунок 3 – Формулы фурокумаринов Фуранокумарины наиболее типичны для растений семейства зонтичных (сельдереных) и подсемейства померанцевые семейства Рутовые. Накапливаются они в основном в корнях, коре, семенах, плодах и в меньших количествах в листьях и стеблях. У зонтичных фурокумариновые соединения могут локализоваться в эфирно – масличных канальцах [6].Биологическая активность фурокумариновФурокумарины обладают фотосенсибилизирующим действием, т. е. способностью повышать чувствительность кожи к действию ультрафиолетовых лучей, и как следствие стимулирируют образование пигмента меланина (т.е. способствуют восстановлению пигментации кожи и волос), кроме этого, способствуют росту волос, используются для лечения болезни витилиго (лейкодермия), гнездовой плешивости, тотального облысения, псориаза [19, 22]. Линейные фуранокумарины псораленового типа, такие как ксантотоксин и бергаптен, проявляют более сильные фотосенсибилизирующие эффекты в отличие от ангулярных форм ангелицинового типа, фототоксический эффект которых слабее [22].Оксифурокумарины, обладает антикоагулянтной активностью (препятствуют свертыванию крови), оказывают Р-витаминное действие [19].Физико-химические свойства фурокумариновФурокумарины представляют собой кристаллические вещества – бесцветные или слегка желтоватые, без запаха (кроме собственно кумарина, имеющего запах свежего сена) [4, 6, 22]. Агликоны растворимы в органических растворителях: хлороформе, метиловом и этиловом спирте, петролейном и диэтиловом эфире, маслах, но нерастворимы в воде; гликозиды - в воде, спиртах и не растворяются в органических растворителях [4, 6, 22].Кумарины при нагревании до температуры ~100ºС возгоняются. Для кумаринов характерна высокая устойчивость лактонного кольца, которое не раскрывается даже при долгом кипячении в воде [4, 6, 22]. Важным свойством кумаринов является раскрытие лактонного кольца при нагревании c разбавленным раствором натрия или калия гидроксида, в результате чего образуются соли кумаровой кислоты (кумаринаты) желтого цвета. При подкислении этого раствора лактоное кольцо кумаринов вновь замыкается, образуя исходный кумарин [4, 6, 22]. Кумарины флуоресцируют в УФ-лучах желтым, зеленоватым, голубым, фиолетовым светом; флуоресценция кумаринов усиливается в парах аммиака и в щелочной среде. Фуранокумарины линейного типа имеют желтую флуоресценцию, тогда как ангулярные фурокумарины флуоресцирует синим цветом [6, 22].Выделение и анализ фурокумариновВыделение фурокумариновДля выделения кумаринов используют классические методы - экстракция в аппарате Сокслета, мацерация, перколяция, ультразвуковая экстракция [6, 13, 22]. Обычно применяются различные растворители, которые позволяют извлекать как агликоны, так и гликозиды [4, 6, 22].Для исчерпывающей экстракции гликозидов кумаринов, как правило, применяют метиловый или этиловый спирт 40-70%; агликонов - хлороформ, диэтиловый эфир, ацетон или бензол [4, 6, 22].В некоторых случаях целесообразно предварительно обработать растительное сырье петролейным эфиром (для предваритльного удаления мешающих липофильных соединений – хлорофиллов, жирных и эфирных масел), а затем экстрагировать агликоны и/или гликозиды кумаринов [4, 6, 22].После отгонки спирта, полученный густой экстракт чаще всего обрабатывают неполярными растворителями: хлороформом, диэтиловым эфиром, в которые переходит сумма липофильных веществ (агликоны кумаринов и других фенольных соединений, липиды, смолы и т.д) [4, 6, 22].Липофильный реэкстракт на холоде обрабатывают водным 0,5% водным раствором гидроксида натрия или калия (в водную фазу переходят соли простых фенольных соединений), водную фазу отбрасывают [4, 6, 22].После остаток обрабатывают в течении часа 10% спиртовым раствором натрия гидроксида (калия гидроксида) – происходит разрыв лактонного кольца, образуются гидрофильные кумаринаты, происходит омыление жиров и других сложных эфиров. Затем балластные вещества (смолы, стерины, спирты) удаляются неполярным растворителем, а для замыкания лактонного кольца и превращения солей фурокумариновых кислот в исходные кумарины водно-щелочной раствор подкисляют при нагревании разбавленными минеральными кислотами – фосфорной или соляной [4, 10]. При этом, помимо перехода кумаринатов в нативные кумарины освобождаются органические кислоты. Смесь кислот и кумаринов извлекается этиловым эфиром (многократное повторное встряхивание). Кислые составные части удаляют добавлением по каплям 0,5% водной щелочи в раствор, в то время кумарины как более устойчивые по отношению к разбавленной щелочи остаются в этиловом эфире [4, 6, 22].Для очистки кумаринов от сопутствующих веществ и для выделения индивидуальных соединений широкое использование получили хроматографические методы, например, тонкослойная хроматография [4, 6, 22].Разделение и качественный анализ фурокумаринов методом тонкослойной хроматографииКумарины, являясь малополярными, ненасыщенными соединениями, хорошо сорбируются гидрофильными сорбентами, в качестве которых чаще всего используют окись алюминия и силикагель, реже – полиамид, сефадекс и др. [4, 22, 23].Ввиду плохой растворимости кумаринов в полярных (гидрофильных) и лучшей – в неполярных (гидрофобных) растворителях разделение в хроматографических системах, основанных на гексане, эфире или хлороформе в комбинации с более полярными растворителями (метиловый спирт, этиловый спирт и этилацетат) в различных соотношениях, что способствует лучшему разделению кумаринов в смеси [4, 22, 23].Хорошее разделение кумаринов в тонком слое было достигнуто при применении следующих систем растворителей:петролейный эфир - диэтиловый эфир (4:1) – применялся для разделения и анализа фурокумаринов плодов амми большой, толуол - эфир диэтиловый (1:1, насыщенные 10% раствором кислоты уксусной) - агликоны фурокумаринов, этилацетат – кислота муравьиная – кислота уксусная ледяная – вода очищенная (100: 11:11:26) - гликозиды фурокумаринов [4, 12, 23].Для обеспечения высокой селективности разделения фурокумаринов в СФХ предложено использовать сорбенты с ароматическими привитыми группами, среди которых оптимальными являются силикагелевые сорбенты с пентафторфенильными модификаторами. Используя в качестве подвижной фазы смесь диоксид углерода – изопропиловый спирт в соотношении 97:3 (давление 100 бар, температура 25ºС) [15].Также применима обращеннофазная двумерная высокоэффективная тонкослойная хроматография на пластинках, покрытых силикагелем с привитой октадецил, диольной или нитрильной фазой в системах этилацетат – диизопропиловый эфир – дихлорметан – н-гептан (ацетонитрил) и метиловый спирт – вода очищенная в различных соотношениях [24].Как правило после хроматографирования хроматографическую пластинку высушивают и просматривают в темной камере с УФ-лампой при длинах волн 254 и 365 нм. Для фуранокумаринов характерна желтая, коричневая, синяя или сине-зеленая флуоресценция. При обработке пластинки 5-10% спиртовым раствором калия гидроксида или парами аммиака наблюдаемая флуоресценция усиливается [4, 23].На хроматограмме флуоресцирующие под УФ-лучами пятна кумаринов обводят карандашом и проявляют диазотированным сульфаниламидом, под действием которого кумарины (в зависимости от структуры) окрашиваются в оранжевый, красно-оранжевый и фиолетовый цвета, которые становятся видимы уже при дневном свете [4].Борщевик Сосновского как перспективный источник фурокумариновКраткая характеристика борщевика сосновскогоБорщевик Сосновского (Heracleum sosnowskyi Manden.) - двулетнее или многолетнее растение семейства Сельдерейные, или Зонтичные (Apiaceae Lindl. syn Umbelliferae) [9, 16]. Стебель прямой, округлый, бороздчато-ребристый, негусто опушенный. Прикорневые и нижние стеблевые листья рассеченные - тройчатые, реже перистые; боковые сегменты широкояйцевидные или округлые, неравнобокие, 3(5)-лопастные или рассеченные; верхний сегмент округлый, более или менее глубоко 3-надрезанный на широкояйневидные, в свою очередь лопастные, доли. Верхние листья уменьшенные, с расширенным влагалищем и 3-лопастной пластинкой. Листья сверху голые, снизу -мелко и оттопырено-опушенные. Зонтики крупные, 30-75-лучевые, верхний нередко диаметром до 0,5 м; лучи зонтиков и зонтнчков мелкошероховато опушенные; листочки оберток и оберточек линейно-шиловидные с расширенным основанием. Зубцы чашечки хорошо заметные, треугольные, зеленые. Лепестки белые, реже розовые, у краевых цветков в зонтике сильно увеличенные. Плодьт обратнояйцевидные или птирокоовальные, длиной 10-12 мм и шириной 6-8 мм, со спинки сплюснутые (рисунок 4) [7, 9]. Рисунок 4 – Борщевик СосновскогоЕстественный ареал обитания простирается в восточной части Большого Кавказа, Восточном и Юго-Восточном Закавказье, северо-востоке Турции. Как заносное растение, встречается в России, Эстонии, Латвии, Литве, Польше, Беларуси, па Украине, на востоке ФРГ (на территории бывш. ГДР) [7, 9].Произрастает на лугах, лесных полянах и опушках, пастбищах, залежах, обочинах дорог в населённых пунктах, зарослях кустарников; легко натурализуется, активно расселяется и внедряется в естественные и полуестественные сообщества, выступая в качестве эдификатора и доминанта изменяя облик экосистемы [3, 9].Химический состав борщевика сосновскогоКумарины: в корнях, листьях, соцветиях, плодах - умбеллиферон, сфондин, бергаптен, изопимпинеллин, ксантотоксин, феллоптерин; в корнях, листьях, плодах - изобергаптен, пимпинеллин, ангелицин; в корнях, плодах - изоимператорин, остол, мармезин; в листьях, плодах - псорален; в корнях - оксипейцеданингидрат, пангелин, аптерин; в плодах - скополетин, биакангелицин, гераклесол, колумбианетин, императорин; эфирные масла – в плодах (α-пинен, р-пинен, р-мирцен, лимонен, γ-терпинен, линалоол, терпинолен, терпиненол и др.); органические кислоты: в плодах - уксусная, масляная, изовалериановая, ангеликовая; жирные кислоты и их производные: в плодах - гексилацетат, гексилизобутират, гексилбутират, гексилизобутаноат, октилацетат, гексилизовалерат, октилизобутират, гексилкапронат, гексил-2-метилбутаноат, гексил-3-метилбутаноат, октенилацетат, октилбутират, октилизобутаноат, н-октилбутаноат, н-октил-2-метилбутаноат, октилизовалерат, октилгексаноат, октилкапронат, октилоктаноат, γ-пальмитолактон [1, 2, 11, 16, 18].Выделение и анализ фурокумаринов борщевика сосновского методом тонкослойной хроматографииСотрудниками лаборатории биотехнологий Новгородского государственного университета имени Ярослава Мудрого (г. Великий Новгород) предложены две схемы выделения фурокумаринов из высушенных листьев борщевика Сосновского [2].В первой извлечение кумаринов из сухого измельченного сырья проводили путем экстракции в течении четырех часов этиловым спиртом 95% с использованием аппарата Сокслета при температуре 80ºС [2]. Вторым методом извлечения кумаринов стал метод возгонки с оксидом магния. Кумарины после нагревания конденсировались в виде кристаллов серого цвета [2]. Для контроля присутствия кумаринов в экстрактах проводили «лактонную пробу» [2].Ученые Горнотаежной станции им. В.Л. Комарова Дальневосточного отделения Российской академии наук (с. Горно-Таёжное) для получения фурокумаринсодержащих экстрактов из листьев и молодых побегов применяли экстракцию спиртом этиловым 70% при температуре 98°С, в течение 3 часов. После экстракции извлечение охлаждали до комнатной температуры и проводили вакуум‑фильтрацию. Фильтрат высушивали в течение 40 мин методом сублимационной сушки при температуре 55 °С [21].В лаборатории фармакокинетики и таргетной фармакотерапии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Национальный исследовательский Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (г. Саранск) изучают состав фурокумаринов сока сочных частей стеблей и листьев [1]. Сок получали с помощью роторной соковыжималки под вытяжной вентиляцией и затем замораживали. После, сумму соединений извлекали хлороформом (кратность экстракции – двухкратная при постоянном перемешивании на магнитной мешалке, соотношение «сок-хлороформ» - 1:4, продолжительность – 24 часа, температура – 25оС). Фурокумарины выделяли путем перевода в кумаринаты 10% раствором натрия гидроксида, с последующим восстановлением нативных форм в кислой среде при нагревании и реэкстракцией хлороформом. Полученный экстракт отфильтровывали через беззольный фильтр и высушивали до постоянной массы [1]. В дальнейшем, для анализа, сухой экстракт растворяли в хлороформе и разделяли методом колоночной хроматографии на силикагеле, при этом используя метод тонкослойной хроматографии для определения момента выхода фуранокумаринов из колонки. Неподвижной фазой послужили алюминиевые пластинки, покрытые силикагелем, подвижной фазой - система ацетонитрил - хлороформ (5:95). В качестве свидетелей использовали растворы аналитических стандартов 5-метоксипсоралена и 8-метоксипсоралена. После хроматографирования пластинки рассматривали в облучателе хроматографическом УФС 254/365 при длине волны 365 нм [1].1 – 8-метоксипсорален, 2 – 5-метоксипсорален,3 – экстракт сока борщевика СосновскогоРисунок 5 -Хроматограмма экстракта сока борщевика Сосновского в системе ацетонитрил - хлороформ (5:95), детектирование при длине волны 365 нмПри анализе хроматограммы, представленной на рисунке 5, установлено, что экстракт сока борщевика сосновского содержит 8-метоксипсорален и 5-метоксипсорален.В Институте экспериментальной ботаники им. В. Ф. Купревича Национальной Академии Наук Беларуси (г. Минск) фурокумарины из сухого растительного материала (корней и листьев) извлекали хлороформом, с последующих их разделением методом ТСХ на силикагелевых пластинках с алюминиевой подложкой и флуоресцентным индикатором в системе петролейный эфир – этилацетат – бензол (2:1:0,5) [11, 18].Пример полученной хроматограммы представлен на рисунке 61 – ангелицин, 2 – экстракт эпидермиса, 3 – ксантотоксин, 4 – экстракт паренхимы, 5 – бергаптен, 6 – экстракт проводящих пучков, 7 – эскулетин, 8 – скополетин, 9 – умбелиферонРисунок 6 -Хроматограмма различных частей листа борщевика Сосновского в системе петролейный эфир – этилацетат – бензол (2:1:0,5).В результате исследований установлено, что в корнях борщевика Сосновского на хроматограммах обнаруживается 10 веществ кумариновой природы, среди которых присутствуют фурокумарины: ангелицин, ксантотоксин, бергаптен, псорален; в листьях - ангелицин, ксантотоксин и бергаптен [1].ЗАКЛЮЧЕНИЕ:Таким образом, на основании проведенного анализа литературы можно сделать следующие выводы:Тонкослойная хроматография – это метод планарной хроматографии, в котором подвижной фазой является полярный или непрлярный растворитель, или их смесь в различных соотношения, движущиеся через тонкий слой сорбента, нанесенный на инертную твердую подложку (пластинку). Разделение компонентов осуществляется по адсорбционному, распределительному, ионообменному мехвнизмам или какой-либо их комбинации.Фурокумарины – эта группа фенольных соединений, производных кумарон-α-пирона, обладающие фотосенсибилизирующим и антикоагулянтным свойствами. В растениях содержатся в виде агликонов и гликозидов, выделяются как полярными (спирт метиловый и этиловый), так и неполярными (диэтиловый эфир, хлороформ) растворителями. Метод тонкослойной хроматографии нашел применение для очистки кумаринов от сопутствующих веществ и выделения индивидуальных соединений. При этом чаще всего в качестве неподвижной фазы для пластинок использую окись алюминия и силикагель; в качестве подвижной фазы (элюента) – неполярные растворители в комбинации с более полярными растворителями (метиловый спирт, этиловый спирт, этилацетат) в различных соотношениях, что способствует лучшему разделению кумаринов в смеси.Борщевик Сосновского является дву- или многолетним травянистым растением семейства Зонтичные. Обладает экспансивным ростом в растительных сообщества, образует большую зеленую фитомассу и, накапливает комплекс фенольных соединений, с преобладанием фурокумаринов. В силу пагубного влияния фотосенсибилизирующих фурокумаринов на животных и людей, контактирующих с ним, неконтролируемого роста и способности вытеснять другие растения и сообществ, подлежит усиленному контролю и уничтожению. Данные факторы указывают на возможность изучения борщевика Сосновского как перспективного источника для выделения фурокумаринов, при условии применения рациональных подходов к его изучнию.Изучением возможности применения метода тонкослойной хроматографии для разделения фурокумаринов борщевика Сосновского занимаются как ведущие российские (Горнотаежная станция им. В.Л. Комарова ДО РАН) и зарубежные (Институт экспериментальной ботаники им. В. Ф. Купревича НАН Беларуси) научно-исследовательские институты, так и специализированные лаборатории высших учебных заведений (лаборатория биотехнологий Новгородского государственного университета имени Ярослава Мудрого, лабораторич фармакокинетики и таргетной фармакотерапии Национального исследовательского Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева»).СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫАгеев, В. П. Качественный и количественный анализ основных производных псоралена сока борщевика Сосновского / В. П. Агеев, В. И. Шляпкина, О. А. Куликов, А. В.Заборовский, Л. А. Тарарина // Фармация. – 2022. – Т.71, №3. – С. 10–17.Андреева, Л. В. Способы извлечения кумаринов из борщевика Сосновского // Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии : материалы III Всерос. науч.-практич. конф. (Ульяновск, 20 мая 2020 г.) / редкол.: Е.И. Антонова [и др.] – Чебоксары: ИД «Среда», 2020. – С. 50-52.Афонин, А. Н. Эколого-географический анализ распространения и встречаемости борщевика Сосновского (Heracleum sosnowskyi Manden.) в связи со степенью аридности территорий и его картирование для европейской территории России / А. Н. Афонин, Н. Н. Лунева, Ю. С. Ли, Н. В. Коцарева // Экология. – 2017. - №1 – С. 66-69.Бердимуратова, Г. Д. Биологически активные вещества растений: выделение, разделение, анализ / Г. Д. Бердимуратова, Р. А. Музычкина, Д. Ю. Корулькин, Ж. А. Абилов, А. У. Тулегенова. - Алматы: Атамұра, 2006. – 438 с.Богданов, В. Л. Биологическое загрязнение территории экологически опасным растением борщевиком Сосновского / В. Л. Богданов, Р. В. Николаев, И. В. Шмелева // Фундаментальные медико-биологические науки и практическое здравоохранение: сб. науч. трудов 1-й Международной телеконференции (Томск 20 января - 20 февраля, 2010). - Томск, СибГМУ, 2010. - С. 27-29.Ботанико-фармакогностический словарь [Текст] / [Блинова К. Ф. и др.] ; под ред. К. Ф. Блиновой, Г. П. Яковлева. - Москва : Высш. шк., 1990. - 270 с.Виноградова, Ю. К. Черная книга флоры Средней России [Текст] : чужеродные виды растений в экосистемах средней России / Ю. К. Виноградова, С. Р. Майоров, Л. В. Хорун. - Москва : ГЕОС, 2010. - 512 с.Государственная фармакопея Российской Федерации ΧIV издания. Том 4 - Текст: электронный // Федеральная электронная медицинская библиотека: [сайт]. – 2018. – URL : https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol4/pharmacopia/14_4/HTML/index.htmlГубанов, И. А. Иллюстрированный определитель растений Средней России : в 3 томах / И. А. Губанов [и др.]. – [2-е изд., испр. и доп.] - Москва : Т-во науч. изданий КМК : Ин-т технологических исслед., 2013 - 30 см. – Т. 2: Покрытосеменные (двудольные: раздельнолепестные). - 2013. - 665 с.Крутов, П. В. Научное обоснование технологии совместного получения аммифурина и анмарина плодов амми большой (Ammi majus L.) : автореферат дис. ... кандидата фармацевтических наук : 14.04.01 / Крутов Павел Валентинович; [Место защиты: Первый моск. гос. мед. ун-т. им. И.М. Сеченова]. - Москва, 2016. - 24 сЛаман, Н. А. Локализация и состав кумаринов в корнях борщевика Сосновского (Heracleum sosnowskyi Manden.) / Н. А. Ламан, А. В. Усик // Вес. Нац. aкад. навук Беларусі. Сер. біял. навук. – 2020. – Т. 65, № 1. – С. 71–75. Николаева, О. Б.. Исследования по стандартизации плодов амми большой - источника фурокумаринов : автореферат дис. ... кандидата фармацевтических наук : 14.04.02 / Николаева Ольга Борисовна; [Место защиты: Всерос. науч.-исслед. ин-т лекарств. и аромат. растений РАСХН]. - Москва, 2010. - 25 с.Орлин, Н. А. Об извлечении кумаринов из борщевика / Н. А. Орлин // Успехи современного естествознания. Биологические науки. - 2010. - №3. - С. 13–14.Отто, М. Современные методы аналитической химии / М. Отто; пер. с нем. под ред. А. В. Гармаша. - 3-е изд. - Москва : Техносфера, 2008. - 543 с.Покровский, О. И.. Процессы разделения фурокумариновых фотосенсибилизаторов в сверхкритических флюидах : автореферат дис. ... кандидата химических наук : 02.00.04 / Покровский Олег Игоревич; [Место защиты: Ин-т общ. и неорган. химии им. Н.С. Курнакова РАН]. - Москва, 2013. - 22 с.Растительные ресурсы России : дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность / Российская акад. наук, Ин-т проблем экологии и эволюции им. А. Н. Северцова, Ботанический ин-т им. В. Л. Комарова ; отв. ред. А. Л. Буданцев. - Санкт-Петербург ; Москва : Товарищество науч. изд. КМК, 2008 - Т. 3: Семейства Fabaceae - Apiaceae. - 2010. – 600 с.Ткаченко, К. Г. Борщевик Сосновского: экологическая проблема или сельскохозяйственная культура будущего? / К. Г. Ткаченко, А. А. Краснов // Бюллетень Ботанического сада — института ДВО РАН. — 2018. - №20. - С. 1–22.Усик, А. В. Качественный состав производных кумарина в тканях листа борщевика Сосновского / А. В. Усик // Природные ресурсы. – 2020.- №1. – С. 58-61.Филонова, М. В. Фурокумарины в коррекции нарушений гемостаза, миело- и гепатотоксичности, вызванных применением цисплатина : экспериментальное исследование : автореферат дис. ... кандидата биологических наук : 3.3.6. / Филонова Мария Васильевна; [Место защиты: Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук]. - Томск, 2021. - 24 с.Хохлова, Е. А. Контроль качества растительных препаратов промышленного и аптечного производства с использованием системы ВЭТСХ / Е. А. Хохлова, А. А. Здорик // Фармацевтическая отрасль. - 2016. - Т. 20, № 4. - С. 82-84.Юрлова, Л.Ю. Фурокумарины Heracleum sosnowskyi и Heracleum moellendorffii / Л. Ю. Юрлова, Д. М. Черняк, О. П. Кутовая // Тихоокеанский медицинский журнал. –2013. – №2. – С. 91-93.Bruni, R. Botanical Sources, Chemistry, Analysis, and Biological Activity of Furanocoumarins of Pharmaceutical Interest / R. Bruni, D. Barreca, M. Protti // Molecules. – 2019. – Vol.24, No. 11. – p. 2163.Wagner, H. Plant Drug Analysis: A Thin Layer Chromatography Atlas / H. Wagner, S. Bladt, E. Zgainski; Institut für Pharmazeutische Biologie der Universität München. – [2nd ed.] - Munich: Springer, 1996. - 384 p.Waksmundzka-Hajnos, M. Two-dimensional thin-layer chromatography of selected coumarins / M. Waksmundzka-Hajnos [et al.] // Journal of Chromatographic Science. - 2006. - Vol.44, No. 8. – pp. 510-517.